依鲁替尼(ibrutinib)、伊布替尼可减少脂多糖诱导的促炎细胞因子水平-

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所属分类:疗效
摘要

为了测试依鲁替尼对神经炎症的影响,我们首先检测依鲁替尼是否对BV2小胶质细胞有毒性。BV2小胶质细胞用vehicle(1%DMSO)或依鲁替尼(100、250、

  依鲁替尼(ibrutinib)不发挥毒性作用,对BV2小胶质细胞的浓度达到25°M  

  为了测试依鲁替尼(ibrutinib)对神经炎症的影响,我们首先检测依鲁替尼(ibrutinib)是否对BV2小胶质细胞有毒性。BV2小胶质细胞用vehicle(1%DMSO)或依鲁替尼(ibrutinib)(100、250、500、750或1000nM)处置24小时,并进行MTT检查。依鲁替尼(ibrutinib)在低剂量时没有表现出毒性。我们还检测了高剂量的依鲁替尼(ibrutinib)对细胞活力的影响。为此,将BV2小胶质细胞用vehicle(1%DMSO)或依鲁替尼(ibrutinib)处置24小时,并进行MTT检查。我们发现,依鲁替尼(ibrutinib)在浓度达到25°M时不会诱导BV2小胶质细胞毒性。  

  确定依鲁替尼(ibrutinib)LPS-induced形态学的改变BV2小胶质细胞,细胞使用依鲁替尼(ibrutinib)(1μM)或车辆(1%DMSO)30分钟,接着用有限合伙人(1μg/ml)或PBS为5.5h。细胞被固定在4%多聚甲醛和应用anti-CD11b抗体。与经车载处置的细胞相比,经脂多糖处置的BV2小胶质细胞显示出长而细的突起,从胞体延伸。依鲁替尼(ibrutinib)预处置后再进行LPS处置,降低了从细胞体延伸出的长而细的突起数量,这些细胞的形态类似于经溶剂处置的细胞。 

  依鲁替尼(ibrutinib)可显著减少脂多糖诱导的促炎细胞因子水平  

  调查潜在的监管依鲁替尼(ibrutinib)对促炎反应的影响,BV2小胶质细胞处置车辆(1%DMSO)或依鲁替尼(ibrutinib)30分钟(1μM),其次是有限合伙人(1μg/ml)或PBS为5.5h。总RNA分离,用rt-pcr和促炎细胞因子水平测定。与不加LPS的溶剂对照医治相比,单独使用依鲁替尼(ibrutinib)并没有改变任何促炎细胞因子水平。然而,依鲁替尼(ibrutinib)显著减少了脂多糖诱导的促炎细胞因子COX-2、IL-6、IL-1的蛋白转移扩散酶、iNOS和TNF--a的mRNA水平。作为一种替代方式,我们使用免疫细胞化学。在本实验中,BV2小胶质细胞区别用vehicle(1%DMSO)或依鲁替尼(ibrutinib)(1°M)处置30min,LPS(1°g/ml)或PBS处置5.5h,然后用抗cd11b和抗cox-2抗体进行免疫染色。依鲁替尼(ibrutinib)可显著减少脂多糖诱导的BV2小胶质细胞COX-2水平。为了进一步证实这些发现,我们进行了IL-1ELISA试验。为此,用依鲁替尼(ibrutinib)(500nM)或溶剂对照液(1%DMSO)预处置BV2小胶质细胞30分钟,用LPS(100ng/ml)或PBS处置24小时,并进行IL-1ELISA检查。与上述结果一致的是,与LPS处置相比,依鲁替尼(ibrutinib)显著减
依鲁替尼(ibrutinib)、伊布替尼可减少脂多糖诱导的促炎细胞因子水平-
少了LPS诱导的IL-1蛋白的水平。这些结果表明,依鲁替尼(ibrutinib)预处置可调节脂多糖介导的BV2小胶质细胞促炎反应的延长。 

  然后我们研究了依鲁替尼(ibrutinib)医治后是否会改变脂多糖刺激的促炎反应。将BV2小胶质细胞用LPS(1磅/毫升)或PBS处置30分钟,然后用溶剂对照(1%DMSO)或依鲁替尼(ibrutinib)(1磅/毫升)处置5.5小时,分离总RNA,用RT-PCR检查促炎细胞因子水平。同样,与不使用LPS的载体医治相比,依鲁替尼(ibrutinib)本身并没有减少任何促炎细胞因子的水平。然而,依鲁替尼(ibrutinib)医治后显著减少了脂多糖诱导的COX-2、IL-6和iNOS的mRNA水平,但不减少其他促炎细胞因子的mRNA水平。因此,这些数据表明,依鲁替尼(ibrutinib)预处置(作为一种预先防范措施)或医治后(作为一种医治措施)对脂多糖刺激的BV2小胶质细胞的促炎反应有差异。  

  依鲁替尼(ibrutinib)抑制脂多糖刺激的原发性小胶质细胞促炎细胞因子水平的延长  

  为了确定依鲁替尼(ibrutinib)(伊布替尼)是否能调节LPS诱导的原代胶质细胞的促炎反应,我们将原代小胶质细胞区别用vehicle(1%DMSO)或依鲁替尼(ibrutinib)(1,M)处置30分钟,然后用LPS(1,l,g/ml)或PBS处置5.5小时。然后用RT-PCR检查促炎细胞因子水平。LPS医治显著上调了促炎细胞因子的水平。相比之下,依鲁替尼(ibrutinib)显著下调了脂多糖介导的原代小胶质细胞中编码促炎细胞因子COX-2和IL-6的mrna水平的上升。  

  然后我们研究了依鲁替尼(ibrutinib)是否也影响脂多糖刺激的原代星形胶质细胞促炎细胞因子水平。将原代星形胶质细胞用溶剂对照液(1%DMSO)或依鲁替尼(ibrutinib)(1,1,M)处置30分钟,用LPS(1,1,g/ml)或PBS处置5.5小时,然后用RT-PCR检查促炎细胞因子水平。令人惊讶的是,依鲁替尼(ibrutinib)并没有减少脂多糖诱导的原始星形胶质细胞中任何促炎细胞因子的水平。这些数据表明依鲁替尼(ibrutinib)选择性地影响促炎反应取决于细胞类别。依鲁替尼(ibrutinib)能够在老挝东盟购买到吗?详情请扫码咨询:

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